Závěrečná zpráva grantu 001/2002/C/1.LF

Název projektu:Studium maturace mitochondriálního energetického metabolismu v mitochondriích izolovaných z placenty různého gestačního stáří
Hlavní řešitel:MUDr. Tomáš Honzík
Spoluřešitelé: RNDr. Hana Hansíková, CSc; MUDr. Marek Böhm; MUDr. László Wenchich
Období řešení:2002-2003
Celková dotace:486 tis. Kč

Souhrn výsledků

Z klinického hlediska je důležité vědět, jak se maturace mitochondriálního energetického systému podílí na metabolických a neurohormonálních poruchách u nezralých novorozenců v průběhu různých patologických stavů. Kromě již probíhajícího studia maturace mitochondriálního energetického metabolismu  ve svalových vláknech a v hepatocytech, jsou mitochondrie izolované z placenty novorozenců různého gestačního stáří  další dostupnou tkání vhodnou pro toto studium. Cílem projektu bylo zavést metody izolace mitochondrií placentární tkáně a studovat množství, složení a funkce  komplexů dýchacího řetězce a PDH v různém gestačním stáří. Pomocí diferenční centrifugace byly z placenty izolovány tři kvalitativně různé mitochondriální frakce (těžká, lehká a „S 1“ frakce). Z našich výsledků vyplynulo, že „frakce těžkých mitochondrií“ je pro spektrofotometrická  a polarografická měření nejvhodnější. Aktivita enzymatických komplexů v těžké mitochondriální frakci byla dvakrát vyšší, než aktivity detekované ve „frakci lehké“. Současně byl analyzován vliv teploty a času při zpracování placenty na aktivitu komplexů dýchacího řetězce. Ukázalo se, že mitochondrie zamražené mají nižší aktivity enzymů dýchacího řetězce než mitochondrie nezamražené nebo mitochondrie izolované z placenty ponechané 24 hodin při 4 stupních Celsia. Dále naše výsledky dokazují, že komplexy I, II a IV dýchacího řetězce jsou exprimovány v mitochondriích izolovaných z placenty obdobně jako v jiných tkáních. Spektrofotometrická a polarografická měření ukázala neobvykle vysokou  aktivitu rotenon insenzitivní NADH cytochrom c reduktázy, která odpovídá nejspíše kontaminaci mitochondriální frakce frakcí mikrozomální. Oproti jiným tkáním je v placentě významně zvýšená aktivita glycerofosfát dehydrogenázy. Fluorometrickým měřením jsme zjistili mnohokrát vyšší  produkci peroxidu vodíku při použití glycerofosfátu jako substrátu než při použití sukcinátu a NADH.


Výstupy projektu:   Článek (odb. period.)   2
  Přednáška na konferencích domácí 1
  Postery na konferencích   2