Závěrečná zpráva grantu 004/2003/C/1.LF

Název projektu:Vliv ketoanalog na metabolismus proteinů a aminokyselin ve svalu: experimentální model renální insuficience u krys
Hlavní řešitel:MUDr. Vladimír Hanzal
Spoluřešitelé: Doc.MUDr. Milan Holeček, DrSc.; Prof.MUDr. Vladimír Teplan, DrSc.; Mgr. Jana Kadlčíková
Období řešení:2003-2003
Celková dotace:193 tis. Kč

Souhrn výsledků

Vzhledem k uspořádání pokusu (rychlému navození akutního selhání ledvin) jsme použili namísto N-nitro-L-arginin methyl esteru (L-NAME) cisplatinu. Vysoké dávky L-NAME způsobují těžkou hypertenzi a iktus a zvířata rychle umírají. Připravili jsme proto následující model akutního selhání ledvin u mladých potkanů (samiček kmene Wistar). Akutní selhání ledvin bylo vyvoláno jednorázovou aplikací cisplatiny ve fyziologickém roztoku intraperitoneálně.  Byl hodnocen efekt rostoucí dávky cisplatiny - 0,5; 0,6; 0,75; 1; 2mg/ 100g tělesné hmotnosti u skupiny potkanů stáří 14-16 dní a 28-30 dní (hmotnost 30-55g). Účinek cisplatiny byl hodnocen 24 hodin po podání odběrem krve z břišní aorty v pentoparbitalové narkóze dle sérové koncentrace kreatininu a urey. Nefrotoxicita významně narůstala s dávkou cisplatiny, ale rozdíl mezi podáním 1 a 2 mg cisplatiny již nebyl významný. Dále jsme zjistili, že k cisplatině byla citlivější skupina mladších zvířat. Po podání nedošlo k úmrtí žádného zvířete a dle výsledků krevních odběrů 3. den po podání cisplatiny se renální funkce reparovala, což je v souladu s literárními údaji, že cisplatina vyvolává u mladých potkanů reverzibilní poškození ledvin.
Pro zkoumání vlivu ketoanalog na metabolismus proteinů,  t.j. proteolýzu a proteosyntézu použijeme ve 2. fázi pokusů dávku 0,6mg a 1mg/kg, abychom podrobněji rozlišili efekt ketoanalog ve fázi renální insuficience a selhání.
Během pokusu jsme upřesnili metodiku, týkající se proteolýzy a proteosyntézy ve svalové tkáni. Jelikož přípravek
Ketosteril obsahuje směs aminokyselin, včetně ketoanalog leucinu, izoleucinu a tyrosinu, nemohli jsme použít metodu měření oxidace leucinu kvůli interferenci. Při měření proteolýzy bude nutné použít při pokusech pouze směs samotných ketoanalog bez dalších aminokyselin včetně tyrosinu,  protože při fluorimetrickém stanovení tyrosinu byly rozdíly mezi svaly inkubovanými s/bez Ketosterilu velmi významné, ale důvodem byla vysoká koncentrace tyrosinu v médiu s ketoanalogy ještě před měřením proteolýzy.
Pro měření proteosyntézy jsme změnili metodiku a místo značeného leucinu (leucin a isoleucin jsou obsaženy ve směsi) jsme zavedli metodu měření proteosyntézy dle množství inkorporovaného radioizotopem značeného fenylalaninu do svalu.