Závěrečná zpráva grantu 008/2001/C/1.LF

Název projektu:Studium aktivity a proteinového složení komplexu dýchacího retezce a pyruvátdehydrogenázy u pacientu s antimitochondriálními protilátkami
Hlavní řešitel:MUDr. László Wenchich
Spoluřešitelé: Prof.MUDr. Jiří Zeman, DrSc.; MUDr. Tomáš Honzík; RNDr. Hana Hansíková, CSc.
Období řešení:2001-2003
Celková dotace:675 tis. Kč

Souhrn výsledků

    Autoprotilátky proti mitochondriálním antigenům tvoří heterogenní skupinu protilátek, které mohou vznikat proti různým mitochondriálním proteinům při celé řadě onemocnění s rozmanitou etiologií a heterogenními projevy. Pro primární biliární cirhózu (PBC) je charakteristická přítomnost antimitochondriálních protilátek (AMA) ze skupiny M2, do které patří protilátky proti podjednotkám mitochondriálních dehydrogenáz 2-oxo-kyselin: pyruvátdehydrogenáza (PDH), 2-oxoglutarátdehydrogenáza (OGDH) a dehydrogenáza 2-oxo-kyselin s rozvětveným řetězcem.
    Cílem práce byla snaha charakterizovat AMA ze skupiny M2 u pacientů s PBC, v pupečníkové krvi od donošených novorozenců a u kontrol při velmi nízkých titrech proti jednotlivým podjednotkám mitochondriálních dehydrogenáz a studovat aktivity mitochondriálních enzymových komplexů, purifikované i v permeabilizovaných buňkách, po inkubaci se séry od pacientů s PBC a dalšími autoimmuními nemocemi (Sjogrenův syndrom, primární sklerotizující cholangoitis, autoimunní hepatitis) a v izolovaných krevních elementech u pacientů s PBC.
    V séru pacientek s klinickou diagnózou PBC jsme častěji nalezli přítomnost antimitochondriálních protilátek ve třídě IgG proti podjednotkám pyruvátdehydrogenázy E1-alfa a E1-beta a E2 a ve třídě IgM proti podjednotce pyruvátdehydrogenázy E1-alfa než u kontrolních sér. Naopak jsme nepozorovali významné rozdíly ve frekvenci výskytu AMA proti 2-oxoglutarátdehydrogenáze. AMA byly přítomné i ve všech sérech z pupečníkové krve a u kontrol. Naše výsledky jsou v souladu s pozorováním, že IgM autoprotilátky a IgG protilátky proti E2-PDH se v nízkých titrech vyskytují i za fyziologických podmínek u zdravých osob.
    Inhibice aktivity purifikované PDH byla nalezena u všech sér od pacientů s PBC a u pacienta se Sjogrenovým syndromem, zatímco inhibiční účinek na aktivitu PDH u dalších sér nebyl prokázán. Inhibiční vliv sér na aktivitu OGDH v porovnání s kontrolami jsme našli u 14 pacientů s PBC z 25 vyšetřovaných a také u pacienta se Sjogrenovým syndromem. Aktivita E3 byla inhibována sérem od 8 pacientů s PBC ze 14 vyšetřovaných a také sérum pacienta se Sjogrenovým syndromem inhibovalo aktivitu E3.
    V permeabilizovaných fibroblastech od zdravých osob došlo ke snížení celkové aktivity PDH po inkubaci se séry od pacientů s PBC, tento pokles nebyl nalezen po inkubaci se séry od kontrol.
    Zatímco přítomnost AMA u pacientů s jaterním onemocněním není specifická pouze pro PBC, výsledky naší studie podporují představu, že stanovení inhibičního působení AMA na aktivitu pyruvátdehydrogenázy by mohlo rozšířit paletu diagnostických metod u pacientů s podezřením na primární biliární cirhózu. Navíc, inhibice PDH v buňkách pacientů působením AMA by mohlo přispět ke zvýšené produkci kyslíkových radikálů, a tím i přispět k celkovému poškození epiteliálních buněk žlučovodů u pacientů s PBC.