Izolace a charakterizace konjugovaných urobilinoidů
Hlavní řešitel:
MUDr. Libor Vítek, PhD
Spoluřešitelé:
Mgr. Lenka Dudková;
Anna Kolářová
Období řešení:
2001-2003
Celková dotace:
788 tis. Kč
Souhrn výsledků
Výzkumný projekt byl zaměřen na izolaci a charakterizaci konjugovaných urobilinoidů, tj. produktů redukce bilirubinu ve střevním lumen, jejichž tvorba je ukazatelem katabolismu bilirubinu. Na základě iniciálních studií s bakteriálním kmenem Cl. perfringens izolovaným ze stolice novorozenců jsme vyslovili podezření, že urobilinoidy mohou vznikat také ve formě konjugátů s kyselinou glukuronovou.
V průběhu řešení grantového projektu bylo dosaženo následujících výsledků:
1. Byla zavedena celá řada nových biochemických metod, jako například preparativní izolace bilirubin diglukuronidu ze žluče, diazotizace žlučových pigmentů s etyl antranilátem a p-jodoanilinem, autoradiografie 14C bilirubinu a jeho redukčních produktů, chromatografie jednotlivých typů urobilinoidů, apod., které výrazně rozšiřují naše možnosti studia metabolismu bilirubinu ve střevě.
2. Byla zjištěna široká substrátova specifita zkoumaného kmene Cl. perfringens vůči celé řadě přirozených i syntetických bilirubinů, a to bez ohledu na jejich odlišnou polaritu, což naznačuje, že tyto pigmenty jsou transportovány do baktérie zřejmě aktivním transportem, podobně jako v případě biodegradace žlučových kyselin střevními baktériemi.
3. Byly detailně charakterizovány produkty redukce bilirubinu bakteriálním kmenem Cl. perfringens. Na rozdíl od výchozího předpokladu nebyla produkce konjugovaných urobilinoidů izolovaným bakteriálním kmenem prokázána. Bilirubin diglukuronid musí být před svou redukcí nekonjugován b-glukuronidázou. Bylo zjištěno, že redukce bilirubinu výše uvedeným bakteriálním kmenem je zastavena na úrovni urobilinogenu a další formy pokročilé redukce, jako je sterkobilinogen, již nevznikají.