Závěrečná zpráva grantu 030/2001/C/3.LF

Název projektu:	Exprese CD44 v uroteliálním karcinomu močového měchýře a její význam v biologickém chování nádorů
Hlavní řešitel:	Prof. MUDr. Václav Mandys, CSc.
Spoluřešitelé:	MUDr. Jitka Kuncová; MUDr. Miroslav Záleský
Období řešení:	2001-2003
Celková dotace:	495 tis. Kč

Souhrn výsledků

Výsledky získané v průběhu řešení grantového projektu je možné rozdělit do tří oblastí:
1) Imunohistologické hodnocení exprese molekul CD44 v bioptických vzorcích uroteliálních karcinomů a vztahu exprese CD44 ke stupni diferenciace nádoru, proliferační aktivitě nádorových buněk a vybraným markerům nádorové transformace. Zjistili jsme, že u dobře diferencovaných nádorů (G1, G2) je příznačná převážně difúzní membránová pozitivita CD44, většinou v celé šíři nádorového epitelu, která odráží alteraci diferenciace buněk těchto karcinomů a odpovídá i prostorovým přesunům nediferencovaných elementů fenotypicky blízkých progenitorovým tkáňovým buňkám do povrchových úseků nádorového epitelu. Pro nízce diferencované nádory (G3, G4) je příznačné výrazné snížení až úplná ztráta exprese molekul CD44. Výjimku tvoří nádory vykazující známky spinocelulární diferenciace, u kterých naopak dochází ke zvýšení exprese CD44 molekul. Získané poznatky byly použity v článku uveřejněném v časopise Klinická onkologie, ve dvou kapitolách v monografii Molekulární genetika karcinomu prostaty a prezentovány formou tří přednášek na odborných konferencích. Navíc jsou výsledky této části projektu v současné době zpracovávány v článku určeném pro časopis Urological Research.
2) Hodnocení exprese molekul CD44 v buněčných liniích izolovaných z karcinomu močového měchýře. Zjistili jsme, že imunocytochemicky zjišťované pozitivity obou antigenů byly v buněčné linii 5637, fenotypicky odpovídající nádorovým kmenovým buňkám a vykazující vysokou proliferační aktivitu, rovnoměrné ve většině buněk. Naproti tomu v buněčné linii HT1197 izolované z karcinomu vysokého stupně malignity, která vykazuje značné cytologické nepravidelnosti,.byla zjištěna výrazně heterogenní exprese molekul CD44. Vyšetření pomocí Western blotu i následná densitometrická analýza ukázaly, že v buněčné linii HT1197 tvořené značně atypickými buňkami epitelového fenotypu je výraznější zastoupení imunoreaktivních proteinů v pozici 110kD, odpovídající posttranslančně modifikovaným molekulám CD44s a CD44v6. Naopak větší zastoupení nemodifikovaných CD44 molekul bylo zjištěno v buněčné linii 5637. Výsledky této části studie jsou zpracovány do článku, který je určen pro časopis Folia Biologica.
3) V charakterizace způsobu růstu uroteliálních karcinomů močového měchýře v trojrozměrných orgánových kulturách a určení vztahu strukturálních změn a prostorových přesunů nádorových buněk v kultivovaných tkáňových fragmentech k expresi CD44 molekul a dalších nádorových markerů. V této části projektu byla adaptována unikátní technika kultivace tkáňových fragmentů v trojrozměrném substrátu. Dosud získané výsledky ukazují, že v průběhu kultivace dochází k prostorovým přesunům nenádorových i nádorových epitelových buněk. V kulturách uroteliálních karcinomů bylo zjištěno dlouhodobé přežívání nádorových buněk s prostorovými přesuny jak v oblasti vlastního kultivovaného tkáňového fragmentu, tak do nitra trojrozměrného substrátu s tvorbou sekundárních ložisek připomínající nádorové metastázy.