Závěrečná zpráva grantu 052/2001/C/2.LF

Název projektu:Metabolismus koncových produktu peroxidace lipidu.
Hlavní řešitel:Doc.RNDr. Jiří Wilhelm
Spoluřešitelé: MUDr. Alice Veselá; MUDr. Patrik Hitka; MUDr. Barbora Fišárková; MUDr. Alena Moravová
Období řešení:2001-2003
Celková dotace:748 tis. Kč

Souhrn výsledků

Produkty radikálového napadení membrán, tzv. lipofuscinoidní pigmenty (LFP) jsou fluorescentní a dají se proto dobře studovat fluorimetrickými metodami. Všeobecně se pokládají za koncové produkty, bez dalšího metabolismu. Jejich vlastnosti jsme studovali na erytrocytových membránách peroxidovaných in vitro, které byly fagocytovány makrofágy a drženy několik dní v kultuře. K tomuto účelu jsme rozpracovali metodu trojrozměrných spektrálních souborů, která prokázala změny jak kvalitativní, tak kvantitativní.Ukazuje se, že LFP mohou být dále metabolizovány in vivo, což má závažné důsledky pro objasnění vzniku ceroidu a lipofuscinu v celé řadě patologických stavů i v průběhu fyziologického stárnutí. Po fagocytóze peroxidovaných membrán se objevily úplně nové fluorescentní produkty, odlišné od těch vzniklých in vitro. Tyto výsledky byly prezentovány na společném kongresu HUPO a IUBMB a abstrakt byl publikován:" J. WILHELM, A. SKOUMALOVÁ. The metabolism of fluorescent end products of lipid peroxidation.  Mol.Cell.Proteomics 9(2003)978". Do tisku je připravena publikace:" J. WILHELM, A. SKOUMALOVÁ, L. VAJNER, R.VYTÁŠEK, G. MAHELKOVÁ, M. SRBOVÁ . Macrophages transform fluorescent products of lipid peroxidation after erythrocyte membrane phagocytosis". Dále jsme studovali vliv peroxidovaných membrán na produkci reaktivních sloučenin kyslíku a dusíku při jejich fagocytóze. Vyvinuli jsme metodu stanovení 3-nitrotyrosinu, založenou na využití monoklonálních protilátek, kterou jsme otestovali při stanovení v krvi:"B.FIŠÁRKOVÁ, R. VYTÁŠEK, M. VÍZEK, M. ČERNÝ, J. WILHELM, P. ZOBAN. Hladiny 3-nitrotyrosinu v pupečníkové krvi donošených novorozenců. Neonatologické Listy 7(2001)129. Tuto metodu jsme použili při sledování účinku peroxidovaných membrán na fagocyty. Zde se ukázalo, že fagocytóza erytrocytových membrán nespouští vznik reaktivních sloučenin dusíku a respirační vzplanutí je inhibováno. Respirační vzplanutí bylo studováno metodou chemiluminescence luminolu. Výsledky naznačují, že za mechanismus jsou zodpovědné ionty železa a peroxidační produkty. Tato studie je rovněž připravena k publikaci:"J. WILHELM, A. SKOUMALOVÁ, R. VYTÁŠEK, B. FIŠÁRKOVÁ,  P. HITKA, L. VAJNER. Erythrocyte membranes inhibit respiratory burst and protein nitration during phagocytosis by macrophages. Součástí této práce bylo i vypracování metody využití autofluorescence LFP fluorescenční mikroskopií. Celý projekt přispěl k novému pohledu na problematiku poškození volnými radikály průkazem metabolismu LFP in vivo.