Závěrečná zpráva grantu 264/2001/B-CH/FaF

Název projektu:Receptorově-specifické peptidy: studium chemismu, radioaktivního značení a metody analýzy
Hlavní řešitel:Doc.Ing. Alice Lázníčková, CSc.
Spoluřešitelé: Mgr. Michaela Hamerníková, Ph.D.; Petr Hazdra; Pavel Voráč; Prof. PharmDr. Milan Lázníček, CSc.; PharmDr. František Trejtnar, CSc.; Jarmila Hoderová; Doc. MUDr. Radomír Hrdina, CSc.; Eva Teichmanová; Ivana Filipová; Lenka Čapková; Drahomíra Karlíčková; Mgr. Matěj Syrovátko; MUDr. Zdeněk Fendrich, CSc.; Josef Malý
Období řešení:2001-2003
Celková dotace:723 tis. Kč

Souhrn výsledků


V rámci řešení grantového úkolu bylo studováno radioaktivní značení a metody analýzy potenciálních radiodiagnostik a redioterapeutik, receptorově-specifických peptidů ze skupiny derivátů somatostatinu, které vykazují afinitu k endokrinně řízeným nádorům. Další zkoumané peptidy patřily do skupiny derivátů gastrinu, které se váží na společný receptor CCK-B/gastrin, který je lokalizován na jiných typech nádorů, například malobuněčném plicním nádoru.
U označených peptidů připravených s dostatečnou radiochemickou čistotou byla provedena farmakokinetická studie u laboratorních zvířat, která zahrnovala i stanovení eliminačních mechanismů na perfundovaných orgánech (játra, ledviny). Pro radioaktivní značení byly vybrány jak diagnostické (Tc-99m, In-111), tak i terapeutické (Y-90, případně jeho náhrada Y-88) radionuklidy. Kromě metody přímého značení, oktreotidu a lanreotidu,  techneciem-99m byla použita i metoda značení bifunkčních chelatonů, kdy je biologicky aktivní struktura (peptid) modifikována chelátovou skupinou vázající příslušný radionuklid.
Pro tyto studie byly vybrány deriváty oktreotidu se skupinou HYNIC (hydrazinonikotinová kyselina), která tvoří pevné cheláty s techneciem za přítomnosti koligandu EDDA (etylendiamindioctová kyselina) nebo tricinu a tetraazaundekanový adukt s Tyr3-oktreotátem, tzv. Demotát 1 (peptid pocházel z ústavu Demokritos v Athénách). Kromě peptidů značených techneciem byly zkoumány další peptidy modifikované jednak chelatonem DTPA (dietylentriaminopentaoctová kyselina), jednak DOTA (tetraazacyklododekan tetraoctová kyselina) pro vazbu radionuklidů lanthanoidového typu, izotopů ytria a india. Pro analýzu radiochemické čistoty byly použity tenkovrstvá chromatografie na ITLC-SG a RP-HPLC analýza s gradientovou eluci, eventuelně za přítomnosti slabého chelatonu k zabránění sorpce iontové formy radionuklidu na kolonu při analýze. V některých případech bylo nutno provádět přečištění peptidu před jeho použitím k biologickým experimentům extrakcí na povrch tuhé fáze (kolonky SEP-pak).
Farmakokinetické studie ukázaly ve všech případech peptidů značených nepřímou metodou vysokou afinitu značených struktur k somatostatinovým receptorům. Všechny studované peptidy se poměrně rychle vylučovaly především ledvinami s hlavním eliminačním mechanismem glomerulární filtrací. HPLC analýza moči experimentálních zvířat dále ukázala, že peptidy se vylučují v nezměněné formě. Určitou nevýhodou je vysoká kumulace radioaktivity v ledvinách, která je nepříjemná především u peptidů značených beta zářiči.
Přímé značení dvou komerčně dostupných peptidů vedlo ke tvorbě nedefinovaných komplexů, pravděpodobně izomerů a ke ztrátě afinity peptidu k příslušným receptorům.