Závěrečná zpráva grantu 057/1997/C/LFHK

Název projektu:Stanovení polymorfismu cytochromu P450 3A za pomoci modelového substrátu - endogenního kortizolu
Hlavní řešitel:MUDr. Stanislav Mičuda
Spoluřešitelé: Hana Krupičková; Prof., MUDr. Jiřina Martínková, CSc.; Ivana Tothová; Ing. Luděk Šišpera, CSc.; Doc., MUDr. Miloslav Pleskot, CSc.; MUDr. Petr Pařízek; MUDr. Martin Hodač
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:601 tis. Kč

Souhrn výsledků

Cílem projektu bylo určení polymorfismu cytochromu CYP3A4 u nemocných indikovaných k terapii amiodaronem. Výsledků bylo následně využito k posouzení vlivu interindividuálně rozdílné metabolické aktivity cytochromu CYP3A4 na farmakokinetické a farmakodynamické vlastnosti amiodaronu. Dalším úkolem naší studie bylo určení vlivu amiodaronu a jeho metabolitu N-deetylamiodaronu (DEA) na metabolickou aktivitu CYP3A4 in vivo (u nemocných) a in vitro (za použití lidských mikrozomů). Aktivita CYP3A4 byla hodnocena změřením 24-hodinové močové exkrece 6beta-hydroxykortizolu (6beta-OHC) a stanovením poměru 6beta-OHC/volný kortizol (UFC) v moči. Hodnocené farmakokinetické parametry byly údolní plazmatické koncentrace amiodaronu a N-deetylamiodaronu naměřené ve druhé (79 + 11 dnů terapie amiodaronem) a třetí (182 + 25 dnů amiodaronem) fázi studie. Účinek terapie amiodaronem (farmakodynamika) byl hodnocen vyjádřením změn elektrofyziologických parametrů myokardu zjištěných při invazivním vyšetření před zahájením terapie amiodaronem (diagnostické) a ve druhé fázi studie (kontrolní). Do souboru nemocných bylo zařazeno 12 jedinců, kterým se podařilo dokončit protokol v dostatečném rozsahu.
         1) Zjištěné interindividuální rozdíly v aktivitě cytochromu CYP3A4 byly výrazné. V den č. 1 (bez amiodaronu) se hodnoty indexu 6beta-OHC/UFC pohybovaly v rozmezí 2.93 - 13.2 (medián = 4.29) a množství 6beta-OHC vyloučeného za 24-hodin kolísalo od 215.6 do 1161.1 nmol/24 hod (medián = 729 nmol/24 hod). Obě měření tedy naznačují asi 6-ti násobnou variabilitu aktivit CYP3A4 mezi nemocnými. Na druhé straně intraindividuální variabilita byla nízká - jak 24-hodinová exkrece 6beta-OHC, tak poměr 6beta-OHC/UFC poskytovaly v rámci jednoho nemocného podobné údaje (r = 0.73, p < 0.01). Při následném hodnocení se nám nepodařilo prokázat závislost mezi aktivitou CYP3A4 (měřenou v době bez terapie amiodaronem) a farmakokinetikou nebo farmakodynamikou amiodaronu. Výjimku představuje korelace mezi poměry 6beta-OHC/UFC a koncentracemi amiodaronu naměřenými ve třetí fázi (rs = -0.58, p < 0.05). Asociaci jsme rovněž pozorovali mezi 24-hodinovými exkrecemi 6beta-OHC a koncentracemi amiodaronu ve třetí fázi (rs = -0.64, p < 0.025) a mezi 24-hodinovými exkrecemi 6beta-OHC a poměry N-DEA/amiodaron ve třetí fázi (rs = 0.56, p < 0.05).
         2) Vliv amiodaronu na metabolickou aktivitu CYP3A4 byl posuzován srovnáním hodnot poměru 6beta-OHC/UFC a 24-hodinové exkrece 6beta-hydroxykortizolu naměřených před první aplikací amiodaronu s odpovídajícími hodnotami naměřenými třetí den terapie. U obou parametrů došlo 3 den terapie nárazovou dávkou amiodaronu (800 mg/den) k statisticky signifikantnímu poklesu (p < 0.05). Tato skutečnost naznačuje, že kontinuální aplikace amiodaronu snižuje aktivitu CYP3A4, a to již časně po začátku terapie. Pro verifikaci byla provedena in vitro inhibiční studie za použití suspenze lidských mikrozómů od třech dárců. Její výsledky ukázaly, že DEA je schopen inhibovat aktivitu CYP3A4 podstatně výrazněji než jeho mateřská látka (amiodaron).
         V této studii se podařilo prokázat, že metabolická aktivita CYP3A4 signifikantně ovlivňuje plazmatické koncentrace amiodaronu při dlouhodobé terapii. Lze proto uzavřít, že interindividuální variabilita exprese CYP3A4 představuje rizikový faktor v léčbě amiodaronem a musí být brána v úvahu zejména u nemocných s primárně nízkou aktivitou této izoformy nebo tam, kde se současně aplikují léčivá známá svým inhibičním potenciálem vůči CYP3A4. Výsledky naší práce navíc ukazují, že amiodaron, ale zejména N-deetylamiodaron jsou silnými inhibitory CYP3A4. Proto existuje reálné nebezpečí závažných lékových interakcí se substráty tohoto enzymu.