Závěrečná zpráva grantu 138/1997/C/1.LF

Název projektu:Průkaz virulentních kmenů Helicobacter pylori u nemocných s vředovou chorobou
Hlavní řešitel:RNDr. Běla Potužníková
Spoluřešitelé: Doc. MUDr. Andrej Souček, CSc; Marta Šafránková
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:720 tis. Kč

Souhrn výsledků

  

         CagA protein je jedním ze znaků virulence kmenů Helicobacter pylori. Metodou imunoblotu jsme popsali výskyt CagA pozitivních kmenů u pacientů s infekcí H.pylori . U 55ti dětí a 525 dospělých se CagA+ kmeny vyskytují v 71 %. Frekvence CagA+ kmenů je závislá na pohlaví. Od chlapců a mužů jsou CagA+ kmeny izolovány častěji (86% resp. 73%) než od dívek a žen (61% a 68%). Přítomnosti CagA proteinu u infikujícího kmene odpovídá i pří-tomnost anti CagA IgG protilátek v séru pacientů (70% IgG pozitivních sér).

         Přímým vyšetřením kmenů i serologicky byl zjištěn pokles podílu CagA pozitivních kmenů u pacientů po neúspěšné eradikaci helikobakterové infekce v důsledku léčby a  popsána podobná ztráta CagA proteinu i genu cagA u kmene H.pylori vlivem kultivace in vitro.

         Byla prokazána variabilita proteinového antigenního spektra kmenů H.pylori. U naprosté většiny nemocných s vředovou chorobou byl metodou PCR jednoznačně prokázán výskyt kmenů H.pylori fenotypu CagA+ a genotypu cagA1, vacAs1 typický pro cytotoxické kmeny a význam detekce těchto kmenů, představujících riziko progrese chronické gastritidy do vředové choroby.  

         Byly vypracovány metody pro laboratorní určení těchto kmenů, jednak přímo z bioptického vzorku a nepřímo - serologicky metodou imunoblotu.

1.    Byl potvrzen význam metody imunoblotu pro kvalitativní rozlišení protilátkové odpovědi ve třídě IgG, která   odráží fenotypovou odlišnost kmenů H.pylori kolonizujících žaludeční sliznici. Metoda imunoblotu umožňuje rozlišit CagA+ a CagA- infekci a je významná pro rozhodování o další léčbě pacienta i jako konfirmační test u ELISA sporných výsledků. Současně byl odzkoušen český set Helicobacter pylori BLOT IgG set, kvalitativní test pro serologický průkaz infekce těmito kmeny (Test-Line) a rozpracováno kvantitativní  provedení EIA serologického testu.

2.    Byla vypracována metoda PCR s typizací pomocí hybridizace pro odlišení ulcerogenních kmenů H.pylori tak, aby byla proveditelná v rutinní PCR mikrobiologické laboratoři.