Závěrečná zpráva grantu 142/1997/C/1.LF

Název projektu:Experimentální ovlivnění embryonální diferenciace typů svalových vláken
Hlavní řešitel:MUDr. Miloš Grim, CSc.
Spoluřešitelé: Eva Kluzáková; MUC. Lucie Riedlbauchová; Georgy Köntges, PhD
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:261,8 tis. Kč

Souhrn výsledků

V průběhu řešení projektu odstoupil zahraniční spolupracovník, jehož účast spočívala v přípravě chimér kuřete a křepelky, které měly být v Praze analyzovány. Zaměření projektu bylo proto omezeno na deskriptivní studium vztahu myogenních buněk, které pocházejí z paraaxiálního mesodermu a buněk mezenchymu pocházejících z neurální lišty. Dosud není znám molekulární podklad jejich interakce v průběhu morfogeneze svalů žaberních oblouků.  
V parafinových řezech a v celých embryích bílé leghornky (stadia HH 15 - 22) byla technikou in situ hybridizace sledována exprese Pax-3 genu. Pax-3 kóduje transkripční faktor ovlivňující expresi genu pro c-met receptor, který je vazebným místem pro scatter factor (SF). Signální systém c-met/SF se uplatňuje v buněčných interakcích vyvíjejícího se embrya. Byla použita antisens mRNA sonda značená digoxigeninem a detekční kit Boehringer Mannheim. Plasmid Bluescript KS s inzertem  660 bp cDNA ptačího Pax-3 genu daroval prof. Gruss. Dále byl v parafinových řezech prováděn imunohistochemický průkaz HNK-1 antigenu, který je markerem buněk neurální lišty a průkaz desminu, jako markeru myogenní diferenciace buněk.
V paraaxiálním mesodermu, ze kterého se diferencuje svalovina žaberních oblouků nebyla exprese Pax-3 zjištěna. Pax-3 byl však exprimován v myogenních buňkách okcipitálních somitů, které migrují do základu jazyka. V migrujících buňkách neurální lišty byla exprese transkripčního faktoru Pax-3 nalezena v mezenchymu okolo čichové plakody a očního pohárku a některých buňkách branchiální krajiny, kde se z neurální lišty diferencuje vazivové stroma svalů.  
HNK-1 pozitivita, typická pro buňky neurální lišty, byla nalezena v nervových i mezenchymových buňkách. V neuronech a glii byla patrná po celé sledované období. Mezenchymové buňky byly HNK-1 pozitivní ve stadiích 12 - 16 HH, kdy migrují do paraaxiálního mezodermu a postupně obklopují skupiny jeho buněk diferencující se v desmin-pozitivní svalové buňky. V pozdějších stadiích jejich HNK-1 pozitivita postupně mizí.
Vývoj branchiálních svalů se tedy absencí exprese Pax-3 v myogenních buňkách liší od vývoje končetinových svalů. Exprese Pax-3 v některých mezenchymových buňkách by však mohla znamenat, že receptor c-met by se přesto mohl uplatňovat v interakci svalových a mezenchymových buněk za morfogeneze svalů žaberních oblouků.