Závěrečná zpráva grantu 151/1997/C/1.LF

Název projektu:Detekce a úloha mutací v genu pro familiární adenomatózní polypózu
Hlavní řešitel:Doc. MUDr. Jan Kapras, CSc.
Spoluřešitelé: Doc. MUDr. Václav Jirásek, CSc.; Doc.MUDr. Milada Kohoutová, CSc.; Doc. MUDr. Václav Mandys, CSc.; Ing. Jitka Štekrová; MUDr. Anna Křepelová, CSc.; MUDr. Jaroslav Kotlas; Mgr. Olga-Niki Koufaki
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:917,5 tis. Kč

Souhrn výsledků

V souboru 46 rodin s klinicky potvrzenou familiární adenomatózní polypózou  (FAP) a 7 rodin se suspektní diagnózou FAP  byl prováděn screening zárodečných mutací v genu APC. Metodou PCR a DGGE bylo zachyceno 21 mutací. Dvě mutace byly zachyceny v exonu 5, tři v exonu 9, jedna v exonu 11, dvě v intronu 11, třináct v exonu 15. Sekvenační analýza 16 mutací odhalila 8 dosud nepopsaných zárodečných mutací genu APC. Posunové mutace (delece 2-5 bp, jednobodové inzerce) tvořily 69%, substituce (nonsense) 19%. Tyto mutace vedly ke vzniku nových terminačních kodonů. 12% jednobazových substitucí se vyskytovalo v donorovém sestřihovém místě intronu 11. Charakter mutací v genu APC se nelišil od dříve popsaných mutací v příslušných exonech. V rodinách s identifikovanou mutací bylo provedeno vyšetření 27 osob v 50% riziku onemocnění s potvrzením nebo vyloučením nosičství mutované alely. Fenotypy postižených jedinců jsou variabilní, ale odpovídají dřívějším nálezům včetně zjištěných korelací genotypu a fenotypu. Vyšetření DNA z 20 parafinových bločků  zdravé tkáně a tkáně různých stádií vývoje adenomů kolorekta šesti pacientů nepřineslo jednoznačné výsledky. Pomocí zvolených mikrosatelitních markerů byla testována ztráta heterozygozity (LOH) a zjištěna mikrosatelitová nestabilita ve 4 vzorcích různých tkání jednoho pacienta. Mutační analýza oblasti nejčastějšího výskytu mutací (MCR) odhalila mutace v oblasti kodonů 1255-1376 v osmi vzorcích různých tkání různých členů jedné rodiny. Získané zkušenosti jsou diskutovány s ohledem na další směr výzkumu a využití metod DNA diagnostiky v klinické praxi.