Závěrečná zpráva grantu 157/1997/C/1.LF

Název projektu:Studium poruch pyruvátdehydrogenázového komplexu na funkční a strukturální úrovni
Hlavní řešitel:RNDr. Hana Hansíková, CSc.
Spoluřešitelé: Alena Šnajperková; Doc. MUDr. Jiří Zeman, DrSc; RNDr. Hana Hansíková, CSc; RNDr. Hana Hansíková, CSc.; MUDr. Ivana Richterová; Mgr. Vilma Konrádová; Ing. Zlata Dudková; Ing. Zlata Dudková; MUDr. Laszlo Wenchich; Ing. Leona Stratilová; Eva Horová
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:560 tis. Kč

Souhrn výsledků

Mezi nejčastější příčiny mitochondriálních onemocnění v dětském věku patří porucha funkce komplexu     
pyruvátdehydrogenázy (PDH), která se obvykle projevuje progredující psychomotorickou retard ací a           laktátovou acidózou. V rámci projektu UK 157/97 jsme zavedli a optimalizovali metody pro stanovení celkové   aktivity pyruvátdehydrogenázy a jejích podjednotek E1, E2 a E3 ve svalových a jaterních  mitochondriích, v kultivovaných fibroblastech a v lymfocytech izolovaných z periferní krve. S využitím  specifických protilátek proti celému komplexu i jednotlivým podjednotkám E1 a E3 jsme optimalizovali elektroforetické  a imunochemické metody pro sledování proteinového složení   a podjednotkového zastoupení  komplexu PDH. Ve tříletém období 1997-1999 jsme vyšetřili více než 200 dětských  a dospělých pacientů s mitochondriální encefalomyopatií a podezřením na poruchu funkce komplexu PDH. U 13 nemocných dětí jsme prokázali  defekt komplexu PDH na enzymatické úrovni.  U sedmi dětí jsme imunochemicky prokázali snížené množství E1 podjednotky PDH. U jednoho chlapce se zástavou vývoje a laktátovou acidozou jsme prokázali poruchu E3 podjednotky. Dosud bylo popsáno jen 14 případů tohoto onemocnění. Molekulární vyšetření v genu pro E3-podjednotku PDH prokázala, že chlapec je „compound heterozygote“ pro bodovou mutaci A1081G, která pochází od matky a jejího otce a která vede k záměně methioninu 8 za Valin, a mutaci G1123A, která pochází od otce a jeho otce a která odpovídá za substituci kyseliny glutamové 18 za Threonin. U dvou pacientů z našeho souboru  jsme nalezli kombinovanou poruchu komplexu PDH  a komplexů dýchacího řetězce. Studovali jsme vliv dichloroacetátu sodného (DCA) na hladiny laktátu v krvi u dětí s poruchou aktivity komplexu PDH. U léčených dětí sice došlo k biochemické úpravě vnitřního prostředí, ale léčba neovlivnila klinický průběh onemocnění. U kriticky nemocných novorozenců s nízkou porodní hmotností jsme studovali maturaci funkce komplexu PDH v novorozeneckém období, tato část studie dále pokračuje. Část výsledků již byla publikována a přednesena na mezinárodních konferencích, další publikace se připravují.