Závěrečná zpráva grantu 170/1997/B-CH/FaF

Název projektu:Selektivní detekce biologicky významných látek v průtokových systémech
Hlavní řešitel:RNDr. Rolf Karlíček, DrSc
Spoluřešitelé: RNDr Jana Dolejšová, CSc; RNDr Miroslav Polášek, CSc; RNDr Petr Solich, CSc; Mgr. Martin Gargoš
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:330 tis. Kč

Souhrn výsledků


Výsledky řešení
V biochemii a farmacii se extrakce na pevnou fázi (SPE) používá při izolaci účinných látek z biologických kapalin; v bioanalýze slouží izolace léčiv před vlastním stanovením hlavně k jejich zakoncentrování a odstranění řady endogenních balastních látek. Tento způsob manuálně vykonávané přípravy analytického vzorku je spojen s rizikem kontaminace ze strany používaných nádob i pracovního prostředí, vyžaduje často větší spotřebu činidel i vzorků a je nejpomalejším a nejpracnějším článkem celého analytického postupu.
Kombinace extrakce na pevnou fázi  s průtokovou injekční analýzou (FIA) má řadu výhod, především u analytických postupů vyžadujících úpravu vzorků . Integrace SPE přímo do průtokového systému analyzátoru umožňuje izolaci léčiv před vlastním stanovením v biologických materiálech a vede k odstranění řady balastních látek. Systém je přitom snadno automatizovatelný.
Experimentálně ověřený systém prokázal, že SPE kolonky (průměr 2 mm, délka 3-10 mm s náplní 10-30 mg pevné fáze) lze využít v průtokovém systému FIA analyzátoru opakovaně, mnohonásobně k zakoncentrování analytu (při dávkování většího objemu vzorku) a k odstranění rušících složek. Využitím systému  SPE - FIA lze dosáhnout zjednodušení a zrychlení analýzy, zvýšení citlivosti a zvýšení selektivity stanovení.


Způsob realizace

Výsledkem řešení projektu je sestavení automatizovaného, počítačem řízeného analyzátoru s dvojitým dávkovacím injektorem a integrovanou SPE mikrokolonou. Systém SPE - FIA prokázal, že lze odstranit nebo výrazně snížit  vliv balastních látek rušících stanovení a k analýze používat původní roztoky vzorků bez předchozí manuelní úpravy. Využitím SPE - FIA systému došlo k výraznému zjednodušení a zrychlení analýzy za současného zvýšení citlivosti a selektivity stanovení. Přitom doba od nadávkování vzorku po maximální hodnotu signálu činí 30-120 sekund, což dovoluje provést dávkování 30-60 vzorků za hodinu.
Při realizaci projektu byl vytvořen software pracující na principu modifikovaného simplexu  a využívající metodu plánovaného experimentu pro nalezení optimálních podmínek stanovení. K získání dat a k ověření podmínek stanovení byl využíván analyzátor FIANAL s fotometrickým průtokovým detektorem. Vlastní systém  SPE - FIA  byl experimentálně ověřen  na úpravě vzorků a stanovení celé řady léčivých přípravků. K dalšímu zvýšení citlivosti a selektivity stanovení byla vedle detekce fotometrické  použita i detekce fluorimetrická.