Závěrečná zpráva grantu 196/1997/B-BIO/FaF

Název projektu:Ivermektin a aktivita biotransformačních enzymů
Hlavní řešitel:Prof. RNDr. Eva Kvasničková, CSc.
Spoluřešitelé: Alena Pakostová; Doc. RNDr. Jiří Lamka, CSc.; MVDr. Lubomír Ducháček; Ing. Barbora Szotáková; RNDr. Lenka Skálová, PhD; Doc. Ing. Vladimír Wsól, PhD; Mgr. Martina Šafářová; Lenka Křídová; Ing. Szotáková Barbora
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:320 tis. Kč

Souhrn výsledků

Ivermektin je antiparazitikum, které je využíváno k terapetickýcm i profylaktickým účelům u hospodářských zvířat i lovné zvěře. Ivermektin je silně lipofilní sloučenina s dlouhým poločasem, vlastnostmi, které jsou znakem účinných enzymových induktorů. Na metabolických přeměnách ivermektinu se podílí svým katalytickým účinkem cytochrom P-450 (jeho isoenzymy), který je snadno indukovatelným enzymem. Podnětem ke studiím byla skutečnost, že po opakovaném podání ivermektinu spárkaté zvěři  byl pozorován rychlý úbytek residuí (do 6 dnů po podání) v porovnání s jednorázovou aplikací. Pracovali jsme s mikrosomální frakcí jater potkana (pro počáteční experimenty a porovnání), s jaterními mikrosomy muflona a daňka.
U kontrolních zvířat i po jednorázovém a opakovaném podání ivermektinu v různých dávkách, byl zjišťován celkový obsah mikrosomálního proteinu. cytochromu P-450 a aktivita vybraných isoenzymů P-450. Pro sledování enzymových aktivitisoenzymů byly vybrány specifické substráty :
alkoxy- aryloxyresorufiny - MROD...methoxyresorufin, marker pro P4501A2, částečně 1A1, EROD...ethoxyresorufin, marker pro P4501A1, částečně  1A2, PROD...pethoxyresorufin, marker pro P4502B, částečně 3A, BROD...benzyl-
oxyresorifin,  marker pro P-4501A1, částečně 1A1 a 2B1);
testosteron - hydroxylace do polohy 6beta je marker aktivity P4503A, hydroxylace do polohy 16alfa, marker P-4502B (závislost i na druhu pokusných zvířat),
chlorzoxazon- hydroxylace do polohy 6, marker aktivity P4502E1, zčásti 1A1.
1. Provedli jsme porovnání vlivu teploty při transportu biologických vzorků z místa odchytu a odběru vzorků do laboratoře. Pro stamdardizaci postupu jsme zvolili zmrazení jaterní tkáně v tekutém dusíku a po transportu do laboratoře byly vzorky po stejném časovém intervalu zpracovány.
2.Po opakovaném podání 10 mg ivermektinu /kg váhy dospělým samcům potkana bly hodnoty  celkového obsahu mikrosomálního proteinu a cytochromu P-450, aktivita EROD (4501A1) a MROD ( P4501A2) signifikantně zvýšeny v porovnání s kontrolní skupinou.
Aktivity 6beta-hydroxylasy a 16alfa-hydroxylasy  testosteronu nebyly u těchto pokusných zvířat změněny.
3. Jednorázová ani opakovaná dávka ivermektinu dospělým muflonům neměla vliv na obsah mikrosomálního proteinu a obsah celkového cytochromu P-450 v porovnání s kontrolní skupinou.
Aktivity EROD (maker P-4501A1, částečně 1A2), MROD (P-4501A2, částečně 1A1), PROD (P-4502B, částečně 3A),
BROD (P-4503A, částečně 1A1 a 2B1), 6 beta- a 16 alfa- hydroxylasa testosteronu ( P4503A a P-4502B) a hydroxylasa chlorzoxazonu (P4502E1, částečně  1A1) byly signifikantně zvýšeny v porovnání s výsledky nalezenými u kontrolních intaktních zvířat.
4. U intaktní (kontrolní) skupiny daňků byla zjištěna vysoká hodnota aktivity 6beta-testosteron hydroxylasy , chlorzoxazon hydroxylasy, EROD a MROD v porovnání s enzymovými aktivitami kontrolní skupiny potkanů i muflonů. Vyloučili jsme vliv dalších xenobiotik ( i ze zevního prostředí)  na změnu jejich aktivity.  Domníváme se, že jsou výsledkem  zvýšené exprese konstitutivních enzymů.
Indukční vlastnosti ivermektinu a  mezidruhové rozdíly v aktivitě enzymů u kontrol i po indukci rozšiřuje znalosti o farmakologických a toxikologických vlastnostech látky ve veterinární terapii a budou využity.