Závěrečná zpráva grantu 240/1999/B-CH/PrF

Název projektu:Příprava nových částečně odbouraných triterpenoidních sloučenin s cytotoxickými účinky
Hlavní řešitel:Mgr. Jan Šarek
Spoluřešitelé: Prof. RNDr. Jiří Klinot, CSc.; Mgr. Iva Tišlerová
Období řešení:1999-1999
Celková dotace:40 tis. Kč

Souhrn výsledků

          V současné době velmi vzrůstá počet tetracyklických sesterterpenů izolovaných z přírodních zdrojů, u nichž byla nalezena vysoká cytotoxická aktivita. V rámci tohoto projektu byla synteticky doplňována námi dříve nalezená skupina in vitro cytotoxicky aktivních výše odbouraných derivátů lupanu. Dále byl hledán vhodný derivát účinné sloučeniny JS 3, vhodný pro zakotvení na matrici, připravována multigramová kvanta této sloučeniny a syntetizována analoga cytotoxicky účinných derivátů ze strukturně modifikovaných výchozích sloučenin. Jako výchozí surovina sloužil lup-20(29)-en-3b,28-diol (betulin), který je ve velkém množství obsažen ve svrchních vrstvách březové kůry a je tedy dobře dostupný.
           Během řešení grantového projektu byly optimalizovanou pětistupňovou syntézou z betulindiacetátu připraveny desítky gramů účinné sloučeniny JS 3 pro další studie in vivo účinnosti na modelech myšího melanomu B16 a myší leukémie P388D1. Devítistupňovou syntézou bylo připraveno dostatečné množství chloracetoxyderivátu JS 3, ze kterého by podle předběžných experimentů mělo být možné připravit 3b-OH derivát JS 3. Hydroxyderivát bude použit pro zakotvení na matrici. Základní skupina in vitro cytotoxicky aktivních sloučenin byla synteticky doplněna, více než 25 novými strukturními deriváty. Byly připraveny Pom a methylestery účinných triterpenoidních kyselin a korelovány jejich cytotoxické aktivity. Pro derivatizace bylo též využito redukovatelnosti 18-oxoskupiny ketoderivátů tetrahydridoboritanem sodným. Další derivatizační reakcí byla reakce polyketonů s diazomethanem. Takto byly získány strukturně zajímavé homoepoxidy a methylenolethery. Byl vypracován oxidační postup vhodný pro preparativní přísun 3b-acetoxy-21-oxolup-18-en-28-ové kyseliny, která otevírá řadu derivátů kyseliny betulinové (lup-20(29)-en-3b-hydroxy-28-ová kyselina) s přemigrovanou dvojnou vazbou. Z této kyseliny bylo známými postupy (oxid seleničitý, kyselina peroxyoctová, oxid rutheničelý atd.) připraveno více než 10 nových sloučenin.
            Všechny sloučeniny připravené v rámci této studie byly otestovány na cytotoxickou aktivitu in vitro MTT-testem na leukemické linii CEM. Některé nově připravené deriváty prokázaly již v prvních předběžných testech cytotoxicity velmi slibné výsledky a budou předmětem dalších studií. Struktury všech připravených sloučenin byly potvrzeny pomocí moderních spektrálních metod, hlavně 1H a 13C NMR spekter a 2D NMR technik, infračervených a hmotnostních spekter.