Závěrečná zpráva grantu 249/1997/B-BIO/PrF

Název projektu:Lektiny a histolytické enzymy larev motolic v ontogenezi a při penetraci do hostitele
Hlavní řešitel:Doc.RNDr. Petr Horák, Ph.D.
Spoluřešitelé: Mgr. Libor Mikeš; Mgr. Lubomír Kovář; Bc. Lukáš Trefil
Období řešení:1997-1999
Celková dotace:255 tis. Kč

Souhrn výsledků

Realizace projektu prokázala přítomnost biologicky aktivních molekul (lektinů, proteáz, hyaluronidáz) u cerkárií dvou druhů motolic - Diplostomum pseudospathaceum a Trichobilharzia szidati.
Lektiny obou druhů motolic (u D. pseudospathaceum v oblasti 23 kDa, u T. szidati v oblasti 50 kDa) byly charakterizovány biochemicky. Jsou lokalizovány v komplexu penetračních žlaz (D. pseudospathaceum - vývody žlaz, T. szidati - postacetabulární žlázy) a vážou především glykosaminoglykany a beta-1,3-glukan (laminarin), což ukazuje na jejich funkci v rozpoznávání kůže a pojivové tkáně. FPLC na ionexu s prepurifikovaným lektinem D. pseudospathaceum ukázalo existenci několika izoforem lektinů. N-terminální sekvenace lektinu P1 D. pseudospathaceum (20 aminokyselin) ukazuje vysokou homologii s úseky prekurzorů rostlinných cysteinových proteáz. Tento výsledek ukazuje na pravděpodobnou existenci proteinových molekul s kombinovanou funkcí - lektin + proteáza.
Další proteázová aktivita byla objevena v oblasti 40 kDa u cerkárií D. pseudospathaceum a ve třech oblastech v rozmezí 25-80 kDa u cerkárií T. szidati. Všechny uvedené proteázové aktivity vykazují efekt vůči gelatinu za neutrálního pH.
V homogenátech obou motolic byla prokázána hyaluronidázová aktivita, přičemž u D. pseudospathaceum by mohla být tato aktivita vázána na některou izoformu lektinu, jak ukázala zymografická analýza v PAA genu.
Testy s dalšími larvami motolic (miracidia a cerkárie dvou echinostom) neprokázaly výskyt lektinů, ani společnou únikovou strategii založenou na expresi povrchových sacharidů.
Výsledky projektu a jejich srovnání s dalšími literárními údaji ukazují na podobné životní strategie larev motolic, které penetrují kůží obratlovčích hostitelů. Výsledky týmu poprvé poukázaly na existenci lektinů v penetračních žlazách i na jejich možné propojení s enzymatickými aktivitami, sloužícími k destrukci kožních a pojivových elementů napadeného hostitele.