Závěrečná zpráva grantu 035/1998/B-CH/FaF

Název projektu:	Studie úpravy biologických vzorků před HPLC analýzou
Hlavní řešitel:	RNDr. Jaroslav Sochor, CSc.
Spoluřešitelé:	Doc. RNDr. Jiří Klimeš, CSc.; PharmDr. Petr Kastner, Ph.D.; Radek Sladkovský; Pavlína Čermáková; Kateřina Vicherová; Eva Hrušková; Martina Hnilová; Jitka Buchníčková; Vadim Vyskočil; Radim Kučera; Monika Ulrichová
Období řešení:	1998-2000
Celková dotace:	250 tis. Kč

Souhrn výsledků

    Při studiu úprav biologických vzorků byla experimentální práce zaměřena především na využitelnost metodik extrakce léčiv na pevných fázích (liquid-solid extrakce - LSE) a extrakce léčiv do organického rozpouštědla (liquid-liquid extrakce - LLE). Biologické vzorky byly representovány vzorky plné krve. Ačkoliv vzorky plné krve představují z analytického hlediska "složitější" vzorky než jsou vzorky plasmy či séra, byly vzorky plné krve k analýze zvoleny proto, že zjištěné koncentrace lépe korelují se skutečnými hladinami léčiv v krvi než koncentrace určené v plasmě či séru, přičemž část léčiv může být vázána na erytrocyty.

    Byly vypracovány postupy pro LSE i LLE vzorků plné krve u vybraných léčiv, která byla analyzována s využitím HPLC. Vypracovaným extrakčním postupem bylo extrahováno buď samotné léčivo (kys. meklofenamová či kys. tiaprofenová) a nebo byl extrakční postup optimalizován tak, aby jím bylo možno současně z biologického vzorku extrahovat jak účinné léčivo, tak i aplikované proléčivo (např. indomethacin extrahovaný současně s podávaným tropesinem či nabumeton a z něho uvolněná účinná kyselina 6-methoxy-2-naftyloctová).
    Vhodnost extrakční metodiky, jak z hlediska odstranění endogenních látek, tak i extrakční účinnosti léčiv, byla ověřena HPLC analýzou extrahovaného vzorku. Vypracované extrakční postupy byly porovnány a zhodnoceny. U optimálního extrakčního postupu byla ověřena reprodukovatelnost HPLC analýzou série modelových vzorků.
    Na základě zjištěných experimentálních výsledků u vybraných léčiv bylo patrno, že LLE bylo vhodnější použít při současném hodnocení léčiva a proléčiva. Při hodnocení samotného léčiva ( např. kyselina meklofenamová, indomethacin či kyselina tiaprofenová) byly výsledky LLE a LSE srovnatelné a oba extrakční postupy použitelné. V tomto případě byla pro praktické použití zvolena LSE pro její lepší reprodukovatelnost a snadnost provedení.

   Výsledky řešené grantové problematiky, tj. vypracované extrakční postupy, LSE, event. LLE, pro úpravu vzorků krve před HPLC analýzou léčiv v biologických vzorcích, byly aplikovány na hodnocení některých léčiv testovaných v rámci farmakokinetické studie vypracovávané ve spolupráci s Lékařskou fakultou UK v Hradci Králové.
   Jako další z přínosů řešení grantu bylo získání zkušeností s úpravou biologických vzorků a tyto zkušenosti, včetně experimentáních výsledků, byly již uplatněny při výuce studentů na Farmaceutické fakultě UK při vědecko-výzkumné činnosti v oblasti analýzy léčiv v biologických materiálech.
   Pro úplnost lze uvést, že poznatky získané při studiu úprav biologických vzorků mohou být využity v klinické praxi pro zjišťování lékových hladin.

    Výsledky získané při řešení grantu č. 35/1998/B CH byly presentovány formou posterů na vědeckých konferencích (4 postery) a zpracovány do 3 původních prací, publikovaných v odborných časopisech.