Závěrečná zpráva grantu 025/2000/C/1.LF

Název projektu:Mutační analýza genů BRCA1 a BRCA2 u karcinomu prsu a ovária
Hlavní řešitel:MUDr. Petr Pohlreich, CSc.
Spoluřešitelé: MUDr. Jana Stříbrná, CSc.; MUDr. Zdeněk Kleibl, Ph.D.; MUDr. Michal Zikán; Marie Epsteinová; Mgr. Markéta Janatová
Období řešení:2000-2002
Celková dotace:450 tis. Kč

Souhrn výsledků

Dominantně působící predispoziční geny se podílí na vzniku 5% - 10% nově diagnostikovaných karcinomů prsu. Dědičný karcinom prsu se často sdružuje s karcinomem ovaria a  rovněž  ho charakterizuje časný výskyt a vysoké procento případů oboustranného postižení.  Mutace tumorsupresorových genů BRCA1 a BRCA2  jsou odpovědné za většinu dědičných nádorů. Úloha genu BRCA1 byla potvrzena u přibližně  52% rodin a genu BRCA2 u 32% rodin. Vazba ke genu BRCA1 byla nalezena u většiny (80% - 90%) rodin s výskytem karcinomu prsu a ovaria. Bylo odhaleno několik set inaktivujících mutací zasahujících do celé kódující oblasti genů BRCA1 a BRCA2. Populačně specifické mutace byly objeveny u některých etnických skupin. Cíl projektu: Cílem studie byla analýza mutací genů BRCA1 a BRCA2 u velké skupiny rodin s  rizikem vývoje karcinomu prsu a ovaria. Pozornost byla věnována charakterizaci genových defektů a optimalizaci metodických postupů umožňující jejich rychlou detekci. Pacienti: Mutační analýza byla provedena u 50 pacientek s časným karcinomem prsu (do 30 let) nebo ovaria (do 40 let) a 112 pacientek z rizikových rodin. Genetické testování bylo nabídnuto (1)  rodinám se dvěma přímými příbuznými s karcinomem prsu nebo ovaria do 50 let a (2)  rodinám se třemi a více případy karcinomu v libovolném věku. Od všech pacientek  byl získán informovaný souhlas s genetickým vyšetřením a pacientky byly informovány o výsledku testování. Metodika: Genomová DNA a celková RNA byly získány  z periferní nesrážlivé krve. Celá kódující sekvence genů BRCA1 a BRCA2 byla rozdělena na překrývající se fragmenty a amplifikována pomocí PCR a RT-PCR. Zárodečné mutace byly detekovány pomocí PTT (protein truncation test). Detekované genové alterace byly charakterizovány přímým sekvenováním fragmentů PCR. Výsledky: Bylo nalezeno 17 různých inaktivujících mutací ve 30 (18.5%) rodinách. Ve skupině 50 pacientek s časným karcinomem byly nalezeny tři mutace (6%), zatímco ve skupině 112 pacientek z rizikových rodin  byla nalezeno 27 mutací (24.1%). U 64 rodin s výskytem karcinomu prsu  bylo detekováno 12 mutací (18.7 %); u 48 rodin s výskytem karcinomu prsu a ovaria bylo  nalezeno 15 mutací (31.2%). Mutace genu BRCA1 byly identifikovány ve 24 rodinách (14.8%), zatímco mutace genu BRCA2  pouze v 6 rodinách (3.7%). Jedna mutace genu BRCA2 byla nová, ostatní detekované genové alterace již byly popsány. Mutace 5382insC genu BRCA1 byla nalezena ve 12 rodinách a mutace C61G ve 3 rodinách, což představuje 50% všech detekovaných genových defektů. Analýza genu BRCA1 na úrovni cDNA odhalila v 10 rodinách 7 různých variantních transkriptů. S výjimkou dvou případů, není jejich translace spojena s posunem čtecího rámce. Mechanismus vzniku alternativních produktů transkripce ani jejich biologický význam není znám. Závěry: Pomocí PTT testu a přímým sekvenovámím fragmentů PCR se podařilo detekovat 30 inaktivujících mutací genů BRCA1 a BRCA2. Lze předpokládat, že rychlý prescreening opakujících se populačně specifických mutací umožní usnadnění dosud poměrně náročné analýzy.  Analýza genů na úrovni RNA se do budoucnosti jeví jako výhodná z hlediska detekce sestřihových variant a rozsáhlých genových defektů, které jsou poměrně časté, ale unikají běžnému mutačnímu screeningu. Analýza BRCA genů se rovněž provádí v rodinách pozitivně testovaných osob. Preventivní klinická péče je u asymptomatických nosičů mutace nezbytná z hlediska časné diagnostiky nádorového onemocnění. Publikace: P. Pohlreich a spol. Mutations of the BRCA1Gene in Hereditary Breast and Ovarian Cancer in the Czech Republic. Med Princ Pract 2003;12:23-29. Výsledky byly dále prezentovány formou posterů na 2 mezinárodních a 1 národní konferenci.