Specifické asemblační proteiny pro savčí mitochondriální ATPázu
Hlavní řešitel:
Ing. Andrea Pícková
Spoluřešitelé:
Jan Paul;
MUDr. Josef Houštek, DrSc.
Období řešení:
2002-2003
Celková dotace:
433 tis. Kč
Souhrn výsledků
Kvasinkové proteiny Atp11p, Atp12p, and Fmc1p jsou specifické faktory pro asemblaci F1 části mitochondriální ATP-syntázy. Atp10p a Atp22p se účastní asemblace FO kanálu. Lidské ortology Atp11p and Atp12p (Atpaf1p and Atpaf2p) byly popsány teprve nedávno. Provedli jsme podrobnou sekvenční a fylogenetickou analýzu všech uvedených asemblačních faktorů. Ortology Atp11p a Atp12p hrají pravděpodobně klíčovou úlohu při asemblaci katalytické F1 části ve všech eukaryotních liniích, které jsou schopny syntetizovat ATP v procesu oxidační fosforylace. Atp12p ortology jsou zastoupeny i u endosymbiotických předchůdců mitochondrií, v alfaproteobakteriích. Fmc1p a Atp22p se vyskytují pouze u hub. Atp10p asemblující FO podjednotku a byl nalezen v několika evolučně vzdálených liniích, které zároveň obsahují v podjednotce a specifický C-koncový motiv pravděpodobně zodpovědný za vzájemnou interakci. Ve vzorcích hnědého tuku, ledvin, jater, srdce, mozku a kosterního svalu z 5-denních i dospělých myší byla pomocí kvantitativního real-time PCR zjištěna asi o dva řády nižší exprese ATPAF1 a ATPAF2 genů ve srovnání s expresí genů pro alfa a beta podjednotky. ATPAF1 se chová jako tzv. house-keeping gen, kdežto ATPAF2 exprese dosahuje až 30-násobného rozdílu mezi tkáněmi a profil je podobný distribuci mRNA hladin pro alfa a beta podjednotky. Maximální množství bylo zjištěno v hnědé tukové tkáni, která je chudá na ATP-syntázový komplex. Analýza lidských fibroblastů ukázala asi 10x nižší hladiny ATPAF1 a ATPAF2 mRNA oproti alfa a beta transkritům. Exprese těchto genů v buňkách s ATP-syntázovou deficiencí je srovnatelná s kontrolními hodnotami. Test protilátek proti Atp11p a Atp12p naznačil vhodnost použití Atp11p protilátky v analýze savčích tkání. Rekombinantní lidský Atpaf2p bude použit pro novou imunizaci.
Výstupy projektu: Článek (odb. period.) 1 Postery na konferenci národní 1 Postery na konferenci mezinárodní 3