Závěrečná zpráva grantu 016/2002/C/1.LF

Název projektu:Metachromatická leukodystrofie: molekulárně biologická a biochemická studie
Hlavní řešitel:RNDr Jana Ledvinová, CSc
Spoluřešitelé: Ing. Linda Berná; MUDr. Martin Hřebíček; Jana Keslová; Ing. Petr Chrastina; Dana Holanová-Černá
Období řešení:2002-2003
Celková dotace:549 tis. Kč

Souhrn výsledků

Byly studovány molekulárně-genetické a biochemické aspekty metachromatické leukodystrofie (MLD, sulfatidosa; OMIM 250100), kde příčinou defektu je mutace v genu kódujícího arylsufatasu A (ASA E.C. 3.1.6.1) a deficitu prosaposinu (PSAP-d), kde následkem mutace v PSAP genu je zastavena tvorba saposinů A, B, C, D, proteinových aktivátorů některých sfingolipidových hydrolas, včetně ASA (sap B). Důsledkem je v obou případech lysosomální hromadění sulfatidů (u PSAP-d ještě dalších sfingolipidů) a těžký stav pacienta končící smrtí.
Výsledky  lze shrnout do následujících bodů:
1) Byly charakterisovány mutace v ARSA genu ve skupině 11 českých a slovenských pacientů  s MLD a bylo zjištěno 6 dosud nepopsaných mutací, jejichž patogenita je průběžně ověřována. Byly studovány polymorfismy v ARSA genu a zavedena metoda detekce tzv. pseudodeficitu  pomocí restrikční analysy, která výrazně přispěje ke zpřesnění diagnostiky. Výsledky budou využity pro genetické poradenství a prenatální diagnostiku v rodinách s historií MLD. (Publikace: L. Berná et al., Am J Med Genet, 2004, přijato do tisku)
2) Metabolické studie v kulturách kožních fibroblastů pacientů s MLD a pacienta s deficitem prosaposinu (pátý případ na světě) ukázaly, že poruchy degradace sulfatidů jsou ve svém důsledku srovnatelné, ačkoliv příčina je jiná. Byla tak potvrzena nezbytnost saposinu B pro funkci ASA. Tyto zátěžové testy mají praktický význam pro diagnostiku deficitu prosaposinu, event. saposinu B (publikace je v přípravě).
3) Byly připraveny a ověřeny podmínky stanovení sulfatidů a sfingomyelinu metodou tandemové hmotnostní spektrometrie, která bude využívána k diagnostice MLD, deficitu prosaposinu, event. dalších poruch metabolismu sulfatidů.

Výsledky byly presentovány na následujících odborných setkáních:
Dědičné metabolické poruchy, 17. Pracovné dni, Piešťany, Slovensko (květen 2002): 1 poster
Dědičné metabolické poruchy, 18. Pracovní dny,  Slušovice, ČR (květen 2003): 1 poster
European Study Group on Lysosomal Diseases, 14th Workshop, Poděbrady (září 2003): 3 postery
Studentské práce:
1 diplomová práce : Jana Keslová, obhájeno na  PřF UK - Katedra biochemie, červen 2003
1 doktorská disertace: Linda Berná, v přípravě, obhajoba 23. června 2004 na 1.LF UK