Závěrečná zpráva grantu 025/2003/C/1.LF

Název projektu:	Studium vlivu mutací a polymorfismů na klinické projevy mukopolysacharidosy typu I
Hlavní řešitel:	RNDr. Lenka Dvořáková, CSc.
Spoluřešitelé:	MUDr. Martin Hřebíček; MUDr. Larisa Stolnaja; Ing. Linda Berná; Ing Kateřina Veselá; Alžbeta Vážna; Ing. Eva Starcová
Období řešení:	2003-2003
Celková dotace:	300 tis. Kč

Souhrn výsledků

Původně tříletý projekt byl zaměřen na analýzu mutací, polymorfismů a haplotypů u českých a slovenských pacientů s MPS I. V Ústavu dědičných metabolických poruch bylo biochemickými metodami dosud diagnostikováno sedmnáct pacientů s touto chorobou.
V rámci projektu (zkráceného na jeden rok) bylo dosaženo těchto výsledků:
1) Byly optimalizovány metody pro amplifikaci jednotlivých úseků genu pro IDUA a osekvenován gen pro IDUA z kontrolní genomové DNA.
2) Byla izolována genomová DNA a celková RNA ze vzorků pacientů.
3) Byly identifikovány mutace a polymorfismy ve třech rodinách s deficitem IDUA. Dosud jsme nalezli 3 mutované alely a jeden nový polymorfismus.
U pacientky s mírným fenotypem (syndrom Scheieho) byla nalezena prevalentní evropská nonsense mutace W402X. Druhou mutací identifikovanou u této pacientky byla delece deseti nukleotidů v exonu 14. Delece GGAGGTCCCT vede k posunu čtecího rámce od 640. aminokyselinového zbytku (E640fs). Stop kodon je posunut za 732. aminokyselinový zbytek (normální délka polypeptidu je 653 aminokyselinových zbytků). V rámci sekvenování celé kódující oblasti genu byly nalezeny také dva polymorfismy. Dosud nepopsaný polymorfismus c.1589C>T (L530) byl nalezen v heterozygotním stavu a známý polymorfismus Q33H nese pacientka na obou alelách.
U druhé pacientky se středně těžkým fenotypem byla nalezena druhá prevalentní evropská mutace Q70X. U matky tato mutace nalezena nebyla, pravděpodobně ji tedy zdědila po otci. U pacientky byly identifikovány také dva polymorfismy A8 a A20 v heterozygotním stavu.
Třetí pacientka podstoupila v deseti měsících úspěšnou transplantaci kostní dřeně. Fenotyp u ní v té době nebyl rozvinut. Pacientka zdědila nonsense mutaci W420X od matky. Materiál od otce bohužel nemáme.
Molekulární diagnostika u pacientů s MPS I je důležitá z hlediska analýzy korelace genotyp-fenotyp a pro rozhodování o typu vhodné terapie. Umožňuje též identifikaci přenašečů a je nezbytná pro genetické poradenství a prenatální diagnostiku v postižených rodinách.
Vzhledem ke zkrácení projektu nebyly splněny všechny plánované cíle. Na základě úspěšných výsledků jsme se však rozhodli podat další návrh projektu, abychom mohli v započaté studii pokračovat.

Presentace dosažených výsledků:
Sjezd společnosti lékařské genetiky. Září 2003. Plzeň, Česká republika. Přednáška.
Dědičné metabolické poruchy, 19. pracovní dny. Květen 2004. Podbanské, Slovenská republika. Poster.
Diplomová práce: Alžbeta Vážna, obhajoba na PřF UK, Praha, 2006