Závěrečná zpráva grantu 026/2003/C/1.LF

Název projektu:Dědičné poruchy glykosylace proteinů: biochemická a molekulární analýza a korelace mezi genotypem a fenotypem
Hlavní řešitel:RNDr. Hana Hansíková, CSc.
Spoluřešitelé: MUDr. Tomáš Honzík; Olga Brantová; Matouš Hrdinka; Ing. Kateřina Veselá
Období řešení:2003-2003
Celková dotace:292 tis. Kč

Souhrn výsledků



Dědičné poruchy glykosylace proteinů (CDG syndrom, „Congenital Disorders of Glycosylation“) představují rozsáhlou skupinu závažných metabolických onemocnění s autosomálně recesivním typem dědičnosti.  V rámci projektu UK 26/2003/c, jehož hlavní snahou bylo zavést diagnostiku  CDG syndromu pro pacienty ze všech regionů ČR ,  jsme v roce 2003 zavedli a optimalizovali imunoturbidimetrické stanovení nízkosialovaných forem transferinu v séru  (CDT) pomocí setu AXIS-Shield  % CDT. Pro naši laboratoř jsme stanovili referenční rozmezí pro % CDT: pro děti do 1 roku věku 1,84-2,62 %, pro věkovou skupinu nad 1 rok 1,84-3,02 %. V roce  2003 jsme hladinu CDT vyšetřili u 350  pacientů s podezřením na kongenitální poruchu glykosylace a  výrazně patologickou hodnotu  (4-15% CDT) jsme našli u 11 pacientů.
Pro stanovení spektra atypických forem transferinu jsme zavedli a optimalizovali izoelektrickou fokusaci (IEF) s následnou imunofixací . IEF transferinu jsme provedli u  30 pacientů se zvýšenou hladinou % CDT, z nichž  u 8 pacientů  vyšetření prokázalo  patologický profil, především zvýšený obsah disialo- a asialotransferinu.  U všech pacientů s imunochemickým průkazem onemocnění  jsme provedli izolaci leukocytů z periferní krve za účelem stanovení aktivity fosfomanomutázy. U probandů a rodinných příslušníků jsme izolovali genomovou DNA za účelem analýzy genu pro fosfomanomutázu (PMM2).  Mutace v genu pro PMM2, potvrzující CDG typ Ia, byla nalezena  u 6 dětí ze 4 rodin:  2x C357A/G422A, 3x  P113L/G422A, 1x  IVS2+3A>T/ IVS2+3A>T. U dvou dětí molekulární analýzy vyloučily kongenitální poruchu glykosylace typ Ia. Ve spolupráci našeho pracoviště s Centre for Human Genetics Leuven v Belgii byla v  jedné rodině úspěšně provedena prenatální diagnostika. Pro dlouhodobější perspektivu prenatální diagnostiky byla založena banka DNA pacientů s CDG syndromem.
Výstupem jednoletého projektu jsou 2 publikace v národních odborných časopisech s oponentním řízením.