Závěrečná zpráva grantu 084/2003/C/FaF

Název projektu:Studium exprese transportních mechanizmů placentární bariéry v závislosti na stádiu březosti potkana.
Hlavní řešitel:Prof.MUDr. Zdeněk Fendrich, CSc.
Spoluřešitelé: Mgr. Antonín Libra; Mgr. Martina Novotná
Období řešení:2003-2003
Celková dotace:200 tis. Kč

Souhrn výsledků

Během jediného roku realizace projektu grantu GAUK bylo značně pokročeno ve studiu výzkumu exprese P-glykoproteinu v závislosti na stádiu březosti potkana. Výsledky jsou sepisovány v rozpracované publikaci (Novotná a kol., P-glycoprotein expression and distribution in the rat placenta during pregnancy, Reproductive Toxicology). Výsledky byly rovněž prezentovány jako postery na dvou mezinárodních konferencích:

Novotná M, Libra A, Kopecký M, Fendrich Z, Pávek P, Štaud F, Semecký V: Changes in P.glycoprotein expression and distribution in the rat placenta during pregnancy. IFPA Meeting, Mainz Germany. Placenta 24: A.53, Abstract No. P177, 2003.
Fendrich Z, Libra A, Novotná M, Kopecký M, Pávek P, Štaud F, Semecký V: P-glycoprotein expression in the rat placenta during pregnancy. 63rd Internastional Congress of FIP, Sydney, Australia 2003. Abstracts FIP/PAC 2003, p. 22, Abstract No. PDM-P-002.

Za období řešení projektu bylo připraveno téměř 50 vzorků placentárních membránových frakcí potkanů v různých stádiích březosti (11- až 22. den březosti) a byl izolován téměř stejný počet vzorků mRNA. Míra exprese P-glykoproteinového transportéru v potkaních placentách byla sledována na úrovni proteinu i na úrovni mRNA metodami western blotu (imunochemická metoda detekce na úrovni proteinů) a metodou kvantitativní reverzní transkriptázové polymerázové řetězové reakce v reálném čase (Q-RT-PCR; metoda studující expresi genů na úrovni mRNA). Ve spolupráci s Mgr. M. Kopeckým byla lokalizace P-glykoproteinu popsána rovněž imunohistochemickým barvením (pracoviště Doc. Semeckého, Katedra biomedicínských věd, Farmaceutická fakulta UK). Naše výsledky popisují profil exprese P-glykoproteinového transportéru v potkaní placentě v průběhu březosti a přinášejí nové poznatky do této dosud nestudované problematiky.

Zároveň probíhala práce na optimalizaci DNA primerů pro studium exprese  lidských transportérů metodou RT-PCR v lidských placentách. Primery pro tři další ABC-transportéry, lidský P-glykoprotein, BCRP/ABCG2 a MRP2/ABCC2 transportéry byly již navrženy, syntetizovány a s výjimkou MRP2 odzkoušeny v naší laboratoři. Rovněž započala práce na přípravě TaqMan sond pro analýzu exprese genů těchto transportérů. Pro detekci BCRP transportéru na úrovni proteinu a pro imunohistochemii byly otestovány  tři monoklonální protilátky BXP-9, BXP-21 a BXP-53.