Závěrečná zpráva grantu 159/2003/B-BIO/1.LF

Název projektu:	Repertoár „Dipeptidylpeptidase-IV-podobných molekul“ transformovaných neuroektodermových buněk a funkční význam jeho dynamiky
Hlavní řešitel:	Prof.MUDr. Aleksi Šedo, DrSc.
Spoluřešitelé:	RNDr. Karel Bezouška, CSc.; Mgr. Petr Man; Mgr. Petra Mokrá; Mgr. Petr Pompach; Bc. Jan Ševčík
Období řešení:	2003-2003
Celková dotace:	220 tis. Kč

Souhrn výsledků

Dipeptidylpeptidase IV aktivitou a/nebo strukturou homologní (DASH) molekuly se patrně významným způsobem podílejí prostřednictvím proteolytické úpravy svých substrátů-biologicky aktivních peptidů na regulaci buněčného růstu. Cílem tohoto projektu bylo prozkoumat expresi molekul této skupiny v neuroektodermových buňkách různého stupně transformace a různých růstových vlastností.
Biochemické přístupy jasně prokázaly různý fenotyp DASH u jednotlivých linií a zejména jeho změny v závislosti na růstových podmínkách buněk. Precisní analýza expresního spektra DASH molekul podílejících se na celkové DPP-IV-podobné enzymové aktivitě však je s použitím biochemických a imunodetekčních přístupů suboptimální a proto bylo přistoupeno k použití využití metod pokročilé kvantitativní proteomiky. Byl zahájen vývoj metod extrakce a nabohacení DASH molekul ze vzorků, umožňujících následnou mikroidentifikaci hmotovou spektrometrií. Tryptické štěpy molekul získaných několikastupňovou separací a identifikovaných kolokalisací se svou enzymovou aktivitou byly analyzovány nejprve technikou peptidového mapování hmotovou spektrometrií MALDI a poté detailní a kvantitativní analýzou technikou mikroLC-MS/MS na přístroji Finnigan LCQDeca. Ve studovaných vzorcích se těmito metodami podařilo prokázat přítomnost dipeptidylpeptidasy IV, což potvrzuje předchozí biochemické nálezy. V současnosti probíhá adaptace použitých metod pro identifikaci či vyloučení podílu dalších DASH molekul na celkové DPP-IV-podobné aktivitě.
Přestože projekt byl rozhodnutím zadavatele ukončen po prvním roce namísto plánovaných třech let, podařilo se získat a presentovat prioritní výsledky. Vzhledem ke skutečnosti, že výsledky dosavadní práce podporují naši vstupní hypotesu, hledáme cestu, jak v řešení projektu pokračovat.